油焖咨询：
筛选到新的互作蛋白,怎么继续开展工作 - ？
义乌市网友回复：
实验进展介绍: 1,通过GST-PULL DOWN 筛选到一个新的互作蛋白,先命名为A蛋白 3我们发现A蛋白亚细胞水平定位于核膜,靶蛋白目前公认的定位为,细胞核及胞浆都有,且以核内为主,核内功能不是很清楚,报浆部分蛋白主要功能已经...
油焖咨询：
pull down 什么意思 - ？
义乌市网友回复：
pull down 摧毁,推翻;拉下来;使……下跌 短语 pull pull down 使人衰弱 ; 拆毁 Pull Shield Down 卸甲 GST Pull-down 相互作用 ; 蛋白沉降实验 ; 与谷光苷肽巯基转移酶沉淀试验 and pull me down 把我拖下水 pull-down list 下拉清单 pull-down ...
油焖咨询：
用于检测体内蛋白质 - DNA相互作用的技术是B.电泳迁移率变动测定(E...？
义乌市网友回复：
把A蛋白和GST蛋白一起重组表达后,将这个融合蛋白与细胞裂解液或其他样本反应,如果样本中有能与A蛋白互作的B蛋白就会相互结合,形成一个GST+A+B组合蛋白.然后利用GSH柱特异性的识别GST蛋白,把GST+A+B组合蛋白纯化下来后进行检测.由于GST和A蛋白是你自己重组表达的,所以相关信息你都很清楚,那多出来的数据代表的就是B蛋白,通过序列分析比对就能知道B蛋白是什么,最终你就知道是什么蛋白与A蛋白有互作了.
油焖咨询：
pull - down的原理与操作步骤 - ？
义乌市网友回复：
GST融合蛋白沉降技术利用了GST对谷胧甘肤偶联球珠的亲和性,从非相互作用蛋白的溶液中纯化相互作用蛋白. GST融合的探针蛋白从细菌中表达和纯化,并平行制备细胞裂解液(可被35S标记或非标记),再将GST融合蛋白探针和细胞裂解...
油焖咨询：
我要从克隆做到COIP,但是之前没有做过整个系统的实验,可否请做过的前辈介绍一下步骤,万分感谢!？
义乌市网友回复：
方法很多 如果这个基因表达蛋白的结构被解析出来的话 可以根据解析出的结构 分析突变是否在蛋白重要的功能位点 实验方法 克隆得到这个基因, 做定点突变得到你需要的突变基因 在细胞中表达 看蛋白在细胞定位有无变化 做coIP看和蛋白相互作用的蛋白有无变化 如果蛋白是个酶的话 看突变前后催化活性的变化 总之,看具体蛋白制定实验 最后最好做一个转基因的小鼠 把突变的基因转到小鼠中 看突变体和野生型的小鼠的不同